全基因組測序有哪三種方法？三種方法:基因組裝、全外顯子測序(Wngs二代測序的常用方法？焦磷酸測序、合成測序、連接測序和離子半導(dǎo)體測序。第二代DNA測序技術(shù)的操作流程？操作過程如下:1.測序文庫的構(gòu)建

全基因組測序有哪三種方法？

三種方法:基因組裝、全外顯子測序(W

ngs二代測序的常用方法？

焦磷酸測序、合成測序、連接測序和離子半導(dǎo)體測序。

第二代DNA測序技術(shù)的操作流程？

操作過程如下:

1.測序文庫的構(gòu)建

首先制備基因組，然后將DNA隨機(jī)斷裂成幾百個堿基或更少的小片段，并在兩端加入特殊的接頭。如果是轉(zhuǎn)錄組測序，文庫的構(gòu)建相對麻煩。RN段化后，需要反向轉(zhuǎn)化為cDNA，然后加入接頭，或者先將RNA反向轉(zhuǎn)化為cDNA，再將片段加入接頭。

2.錨泊橋

Solexa測序反應(yīng)是在一個被稱為流動池的玻璃管中進(jìn)行的，這個玻璃管被細(xì)分為八個泳道，每個泳道的內(nèi)表面有無數(shù)個固定的單鏈頭。將上述步驟中獲得的具有接頭的DN段變性為單鏈，然后與測序通道上的接頭引物結(jié)合，形成橋結(jié)構(gòu)，用于隨后的預(yù)擴(kuò)增。

3.前置放大

加入未標(biāo)記的dNTP和普通Taq酶進(jìn)行固相橋PCR擴(kuò)增，將待檢測的單鏈橋片段擴(kuò)增為雙鏈橋片段。通過變性，互補(bǔ)的單鏈被釋放并錨定在附近的固體表面。通過不斷循環(huán)，在流動池的固體表面將獲得數(shù)百萬簇待檢測的雙鏈片段。

4.單堿基延伸測序

將四種熒光標(biāo)記的dNTP、DNA聚合酶和接頭引物加入測序的流動池中進(jìn)行擴(kuò)增。當(dāng)每個測序簇延伸其互補(bǔ)鏈時，每個熒光標(biāo)記的dNTP可以釋放相應(yīng)的熒光。測序儀捕捉熒光信號，通過計算機(jī)軟件將光信號轉(zhuǎn)換成測序峰，從而獲得待測片段的序列信息。

5.數(shù)據(jù)分析

嚴(yán)格來說，這一步可以 t不能算作排序操作流程的一部分，但只有通過這一步的前期工作才有意義。測序得到的原始數(shù)據(jù)是長度只有幾十個堿基的序列。應(yīng)該通過生物信息學(xué)工具將這些短序列組裝成重疊群甚至全基因組的框架，或者將這些序列與現(xiàn)有的基因組或相似物種的基因組序列進(jìn)行比較，并進(jìn)行進(jìn)一步分析，以獲得有生物學(xué)意義的結(jié)果。