自學設計有哪些好用的網(wǎng)站？我要自學網(wǎng)，軟件自學網(wǎng)，網(wǎng)易云教室，騰訊教室，中國大學MOOC這些都不錯如何進行引物設計？如果這對通用引物沒有信號，說明這兩個位置有SNP，導致沒有擴增。可以參考幾種方法。1

自學設計有哪些好用的網(wǎng)站？

我要自學網(wǎng)，軟件自學網(wǎng)，網(wǎng)易云教室，騰訊教室，中國大學MOOC這些都不錯

如何進行引物設計？

如果這對通用引物沒有信號，說明這兩個位置有SNP，導致沒有擴增?？梢詤⒖紟追N方法。

1：你可能知道這種細菌的種類和屬，所以去NCBI找到相關種類的16S序列，做序列比對，設計簡并引物，擴增全長，然后測序。

2：你根本不了解物種。你可以在網(wǎng)上找到更多的入門知識。最好放大v3v4區(qū)或V4區(qū)。在放大了其中一些之后，你可以對它們進行排序和比較。一般來說，你可以確認屬，然后按照1的方法。

3:如果部分序列可以通過方法2擴增，但全長引物未能擴增，則將獲得的部分序列用作race。

4:以上所有操作均失敗。第二代的DNA被提取和測序，基因組被直接測量（如果你認為成本太高，你可以減少數(shù)據(jù)量進行比較）。

做RT-PCR設計引物時，找引物序列有哪些好方法？

引物可以由一些軟件設計，如primer 5，但需要注意一些細節(jié)。例如，1。引物應設計在模板cDNA的保守區(qū)。DNA序列的保守區(qū)是通過比較物種間的相似序列來確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（如dnaman）比對，每個基因的同一序列為該基因的保守區(qū)。2引物的長度一般在15到30堿基之間。引物長度一般為18～27bp，但不宜超過38，因為延伸溫度大于74℃，不適合taqdna聚合酶反應。三。引物的GC含量在40%～60%之間，TM值應接近72℃。GC含量過高或過低都不利于引發(fā)反應。上下游引物的GC含量不宜相差太大。另外，上下游引物的TM值（熔化溫度）是寡核苷酸的斷鏈溫度，即50%雙鏈寡核苷酸在一定鹽濃度下的溫度。有效啟動溫度一般比TM值高5～10℃。按公式TM=4（gc）2（at）估算引物TM值時，有效引物TM值為55～80℃，最佳復性條件下，有效引物TM值應接近72℃。

怎樣選擇合適的引物？

在PubMed網(wǎng)站上找到相應基因的mRNA序列，復制到引物設計軟件（如primer premier），軟件會設計不同的正、負鏈引物，選擇合適的一個（得分較高），復制到PubMed網(wǎng)站，下拉框中有PubMed blast，粘貼軟件設計的前、后引物，通過搜索結果判斷引物是否正確、特異。