網(wǎng)友解答: 目前研究維生素C測定方法的報(bào)道較多,有關(guān)維生素C的測定方法如熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法及色譜法等,各種方法對實(shí)

目前研究維生素C測定方法的報(bào)道較多,有關(guān)維生素C的測定方法如熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法及色譜法等,各種方法對實(shí)際樣品的測定均有滿意的效果.

　　為了解國內(nèi)VC含量測定方法及其應(yīng)用方面的現(xiàn)狀及發(fā)展態(tài)勢.方法以"維生素C或抗壞血酸和測定"為檢索詞對1994～2002年中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)中的理工A、B和醫(yī)藥衛(wèi)生專輯進(jìn)行篇名檢索,對所得有關(guān)維生素C含量測定的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)分別以年代、作者區(qū)域、載刊等級、樣品類型、測定方法等進(jìn)行計(jì)量分析.結(jié)果核心期刊載刊文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06％,其中光度法占65.69％,電化法占18.63％,色譜法占12.75％;復(fù)雜被測樣品文獻(xiàn)占文獻(xiàn)總量的45.06％,其中光度法占60.92％,色譜法占19.54％,電化法占10.34％.結(jié)論目前國內(nèi)維生素C含量測定仍以光度法為主流,但近年來色譜法,特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯.

　　一．熒光法

　　1．原理

　　樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化成脫氫型抗壞血酸后，與鄰苯二胺（OPDA）反應(yīng)生成具有熒光的喹喔啉（quinoxaline）,其熒光強(qiáng)度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食物中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。

　　脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物而不與OPDA反應(yīng)，以此排除樣品中熒光雜質(zhì)所產(chǎn)生的干擾。本方法的最小檢出限為0.022 g/ml。

　　2．適用范圍

　　本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定

　　3. 注意事項(xiàng)

　　3.1 大多數(shù)植物組織內(nèi)含有一種能破壞抗壞血酸的氧化酶，因此，抗壞血酸的測定應(yīng)采用新鮮樣品并盡快用偏磷酸-醋酸提取液將樣品制成勻漿以保存維生C。

　　3.2 某些果膠含量高的樣品不易過濾，可采用抽濾的方法，也可先離心，再取上清液過濾。

　　3.3活性炭可將抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，但它也有吸附抗壞血酸的作用，故活性炭用量應(yīng)適當(dāng)與準(zhǔn)確，所以，應(yīng)用天平稱量。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，用2g活性炭能使測定樣品中還原型抗壞血酸完全氧化為脫氫型，其吸附影響不明顯。

　　二、2，6-二氯靛酚滴定法（還原型VC）

　　1、原理：

　　還原型抗壞血酸還原染料2，6-二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原后紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。本法用于測定還原型抗壞血酸，總抗壞血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測定。

　　2、注意事項(xiàng)

　　⑴ 所有試劑的配制最好都用重蒸餾水；

　?、?滴定時(shí)，可同時(shí)吸二個(gè)樣品。一個(gè)滴定，另一個(gè)作為觀察顏色變化的參考；

　　⑶ 樣品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，損失維生素C；

　?、?貯存過久的罐頭食品，可能含有大量的低鐵離子（Fe2+），要用8%的醋酸代替2%草酸。這時(shí)如用草酸，低鐵離子可以還原2，6-二氯靛酚，使測定數(shù)字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生；

　?、?整個(gè)操作過程中要迅速，避免還原型抗壞血酸被氧化；

　?、?在處理各種樣品時(shí)，如遇有泡沫產(chǎn)生，可加入數(shù)滴辛醇消除；

　?、?測定樣液時(shí)，需做空白對照，樣液滴定體積扣除空白體積。

　　3優(yōu)點(diǎn)：它具有簡便、快速、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì)，將給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。在酸性環(huán)境中，抗壞血酸（還原型）能將染料2,6—DCIP還原成無色的還原型2,6—DCIP，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型2,6—DCIP在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當(dāng)用2,6—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí)，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的2,6—DCIP 立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時(shí)，則滴下微量過剩的2,6—DCIP 便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸?。依?jù)滴定時(shí)2,6—DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量 (ml)，可以計(jì)算出被測樣品中抗壞血酸的含量。氧化型2,6—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進(jìn)行反應(yīng)。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后，再用2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。

　　食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì)，其中有些還原物質(zhì)可使2,6—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對定量測定的干擾，可用抗壞血酸氧化酶處理，破壞樣品中還原型抗壞血酸后，再用2,6—DCIP 滴定樣品中其他還原物質(zhì)。然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時(shí)2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的總消耗量中，減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)2,6—DCIP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，即為滴定抗壞血酸實(shí)際所消耗的2,6—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，由此可以計(jì)算出樣品中抗壞血酸的含量。另外，還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與2,6—DCIP反應(yīng)速度的差別，并通過控制樣品溶液在pH1 — 3 范圍內(nèi)，進(jìn)行快速滴定，可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用，一般在這樣的條件下，干擾物質(zhì)與2,6—DCIP的反應(yīng)是很慢的或受到抑制。生物體液（如血液、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難，因?yàn)檫@些樣品中抗壞血酸的含量很低，并且存在許多還原物質(zhì)的干擾，同時(shí)還必須預(yù)先進(jìn)行脫蛋白處理。在生物體液中含有巰其、亞硫酸鹽及硫代硫酸鹽等物質(zhì)，它們都能與DCIP反應(yīng)，但反應(yīng)速度比抗壞血酸慢得多。樣品中巰基物質(zhì)對定量測定的干擾，通?？梢越寮尤雽Α裙郊姿?簡稱PCMB)而得到消除。

　　三、2，4-二硝基苯肼法

　　1．原理

　　總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進(jìn)行比色測定。

　　2．適用范圍

　　本方法適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測定。

　　這是脎比色法，單獨(dú)評價(jià)是因?yàn)槟壳八鳛閂c測定的國標(biāo)法之一，是一種全量測定法，它跟以前的苯肼法原理相近。首先將樣品中的還原型V氧化為脫氫型V，然后與2，4—二硝基苯肼作用，生成紅色的脎，將脎溶于硫酸后進(jìn)行比色。最近國標(biāo)中該法強(qiáng)調(diào)空白，每個(gè)樣品及標(biāo)準(zhǔn)系列均需作對應(yīng)空白，這樣消除色澤、背景不一的誤差。在實(shí)際楊梅汁Vc測定中，操作時(shí)間長，操作要求較嚴(yán)格，試劑較多，就一般實(shí)驗(yàn)室而言是目前可以采用的方法。

　　四 碘量法

　　1、維生素C的原理

　　維生素C包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種。當(dāng)用碘滴定維生素C時(shí)，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子。隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現(xiàn)。碘分子可以使含指示劑（淀粉）的溶液產(chǎn)生藍(lán)色，即為滴定終點(diǎn)。

　　2、注意事項(xiàng)

　　（1）看到紅棕色出現(xiàn)時(shí)要放慢滴定的速度。

　　（2）以顯藍(lán)色在30s內(nèi)不褪色為滴定終點(diǎn)。

　　五L-抗壞血酸(維生素C)測定試劑盒（酶學(xué)方法）

　　1.應(yīng)用于食品，飲料及生物制品檢測

　　2.比色方法

　　此方法用于檢測水果和蔬菜（如馬鈴薯），水果和蔬菜產(chǎn)品（如西紅柿醬、泡菜、果醬、果汁），嬰兒食品，啤酒，飲料，流食，粉狀和烘烤劑，肉產(chǎn)品，奶制品，葡萄酒，還有動物飼料，醫(yī)藥品（如維生素配制、陣痛藥、退燒藥）和生物樣品中的L-抗壞血酸(維生素C)，

　　3.分析物

　　L-抗壞血酸不定量的分布于動物和植物中。人類不能自身生產(chǎn)L-抗壞血酸，因此必須由外源(vitamin C)提供。一般情況下來源于水果和蔬菜中，出于技術(shù)原因，L-抗壞血酸曾被用于食品工業(yè)中的抗氧化劑。它是一種相對敏感的物質(zhì)，L-抗壞血酸的檢測非常適用于從原始水果和蔬菜中加工食品的質(zhì)量評定。

　　L-抗壞血酸用于醫(yī)藥品生產(chǎn)中的組成部分，如維生素產(chǎn)品和陣痛藥，另外，它還用于動物飼料添加劑中。

　　4.原理

　　L-抗壞血酸 (x-H2) + MTT+ PMS— dehydroascorbate (x) + MTT-formazan + H+X

　　L-抗壞血酸 + ? O2 AAO—— dehydroascorbate + H2OX

　　5.特異性

　　在給定的條件下，此方法特別針對于L-抗壞血酸。合成的D-阿拉伯抗壞血酸/阿拉伯糖型抗壞血酸能作為抗氧化劑，也能反應(yīng)，但反應(yīng)速度較慢。

　　6.靈敏度

　　測定靈敏度為0.005個(gè)吸光度單位，樣品體積為1.600ml，此相當(dāng)于0.1mg/l樣品溶液中的L-抗壞血酸濃度。0.015個(gè)吸光度單位的差異能造成0.3 mg/l檢測限，樣品最大體積為1.600 ml.。

　　7.線性

　　測定的線性范圍為0.5 ugL-抗壞血酸（0.3mgL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為1.600ml）到20 ugL-抗壞血酸（0.2gL-抗壞血酸/l樣品溶液體積為0.100ml）

　　8.精密度

　　在用一個(gè)樣品做重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能會產(chǎn)生0.005-0.010個(gè)吸光度單位的差異。標(biāo)準(zhǔn)的相對偏差（變異系數(shù)）大約為1-3%。當(dāng)分析檢測數(shù)據(jù)時(shí)，要考慮到L-抗壞血酸的水溶液穩(wěn)定性較差，尤其是重金屬離子或氧存在時(shí)。

　　9.干擾及錯(cuò)誤來源

　　糧食的成分不經(jīng)常干擾實(shí)驗(yàn)。高濃度的酒精和D-山梨酸醇能降低反應(yīng)速度，大量的亞硫酸鹽必須通過添加甲醛來去除。醋酸抑制酶AAO。金屬和 亞硫酸鹽離子可以導(dǎo)致L-抗壞血酸的自發(fā)分解。

　　10.試劑盒包括內(nèi)容

　　1.磷酸鹽/檸檬酸緩沖液 ———— pH值大約3.5；MTT

　　2.AAO（坑壞血酸-氧化酶）—— 每板約17 U AAO

　　3. PMS 溶液

　　六．磷鉬藍(lán)分光光度法測定維生素C

　　基于在一定的反應(yīng)條件下，維生素C可以定量地將磷鉬酸錠還原成磷鉬藍(lán)，提出了一種新的測定維生素C的分光光度法。該方法很方便、快速地測定生物、藥物等試樣中的維生素C，準(zhǔn)確度和重復(fù)性均達(dá)到令人滿意的程度。

　　1 適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于果品、蔬菜及其加工制品中還原型抗壞血酸的測定(不含二價(jià)鐵、二價(jià)錫、一價(jià)銅、二氧化硫、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽),不適用于深色樣品。

　　2 測定原理

　　染料2,6－二氯靛酚的顏色反應(yīng)表現(xiàn)兩種特性,一是取決于其氧化還原狀態(tài),氧化態(tài)為深藍(lán)色,還原態(tài)變?yōu)闊o色;二是受其介質(zhì)的酸度影響,在堿性溶液中呈深藍(lán)色,在酸性介質(zhì)中呈淺紅色。

　　 用藍(lán)色的堿性染料標(biāo)準(zhǔn)溶液,對含維生素 C的酸性浸出液進(jìn)行氧化還原滴定,染料被還原為無色,當(dāng)?shù)竭_(dá)滴定終點(diǎn)時(shí),多余的染料在酸性介質(zhì)中則表現(xiàn)為淺紅色,由染料用量計(jì)算樣品中還原型抗壞血酸的含量。

　　七.二甲苯－二氯靛酚比色法

　　1 適用范圍

　　測定深色樣品中還原型抗壞血酸。

　　2 測定原理

　　用定量的 2,6－二氯靛酚染料與試樣中的維生素 C進(jìn)行氧化還原反應(yīng),多余的染料在酸性環(huán)境中呈紅色,用二甲苯萃取后比色,在一定范圍內(nèi),吸光度與染料濃度呈線性相關(guān),收剩余染料濃度用差減法計(jì)算維生素 C含量。

　　八.近紅外漫反射光譜分析法(NIRDRSA)

　　自1965年首次應(yīng)用于復(fù)雜農(nóng)業(yè)樣品分析后，因其具 有樣品處理簡單、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，逐漸受到分析界的重視。此法已廣泛應(yīng)用于石油、紡 織、農(nóng)業(yè)、食品、藥物分析等領(lǐng)域[1，2]。在藥物分析中，NIRDRSA可以進(jìn)行定性 鑒別、定量分析等工作。

　　 維生素C是一種不穩(wěn)定的二烯醇化合物，其藥典[3]含量測定方法為碘量法。我 們采用近紅外漫反射光譜技術(shù)直接測定維生素C含量，樣品無需預(yù)處理，方法簡便，結(jié)果可 靠。

　　這是因?yàn)?，近紅外譜區(qū)光的頻率與有機(jī)分子中C-H，O-H，N-H等振動的合頻與各級倍頻的 頻率一致，因此通過有機(jī)物的近紅外光譜可以取得分子中C-H，O-H，N-H的特征振動信息 。由于近紅外光譜的譜帶較寬，譜圖重疊嚴(yán)重，不能用特征峰等簡單方法分析，需要運(yùn)用計(jì) 算機(jī)技術(shù)與化學(xué)計(jì)量學(xué)方法。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的是偏最小二乘法(PLS)[4]，首先利用 定標(biāo)集建立預(yù)測模型，然后將預(yù)測集作為未知樣本，根據(jù)預(yù)測模型進(jìn)行預(yù)測。

　　 對所選擇的譜區(qū)范圍，采用對反射吸光度的MSC(散射校正)預(yù)處理，對25個(gè)樣品進(jìn)行交叉 驗(yàn)證，即選擇一個(gè)樣品，從校正集中除去該樣品對應(yīng)的光譜和濃度數(shù)據(jù)，并設(shè)光譜主成分?jǐn)?shù) 為1，循環(huán)迭代樣品數(shù)和主成分?jǐn)?shù)，計(jì)算預(yù)測殘差平方和,確定所需主成分?jǐn)?shù)。若主成分選擇 過小，會丟失樣品信息，過大會造成過度擬合。當(dāng)主因子為2時(shí)，預(yù)測殘差平方和值最小， 為2.029，故選擇主因子數(shù)為2，建立最佳PLS校正數(shù)學(xué)模型。

　　九 電位滴定法

　　1.原理：根據(jù)滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應(yīng)終點(diǎn).

　　Pt為指示電極，甘汞作參比電極

　　E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/I-+k(常數(shù))

　　2.原理(具體來說:)

　　隨著滴定劑的加入，由于發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，待測離子濃度將不斷變化；從而指示電極電位發(fā)生相應(yīng)變化；導(dǎo)致電池電動勢發(fā)生相應(yīng)變化；計(jì)量點(diǎn)附近離子濃度發(fā)生突變；引起電位的突變，因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點(diǎn)。

　　3.計(jì)算式：(與碘量法相同) Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%

　　4.優(yōu)點(diǎn)：

　　解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時(shí)無法指示終點(diǎn)的問題

　　用線性電位滴定法分析抗壞血酸,抗壞血酸回收率為99.80％～101.5％,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.61％;分析維生素C片中的抗壞血酸,相當(dāng)標(biāo)示量為98.90％～100.5％,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于0.48％,說明線性電位滴定法分析維生素C片中的抗壞血酸含量是可行的.

　　十 .分光光度法

　　1. 原理：

　　維生素C在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸，pH5,脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開裂，形成二酮古洛糖酸。脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎

　　脎在500nm波長有最大吸收

　　根據(jù)樣品溶液吸光度，由工作曲線查出VC的濃度，即可求出VC的含量

　　十一 庫侖滴定法

　　1.原理：庫侖滴定法屬于恒電流庫侖分析。

　　是在特定的電解液中，以電極反應(yīng)產(chǎn)物為滴定劑（電生滴定劑，相當(dāng)于化學(xué)滴定中的標(biāo)準(zhǔn)濃液）與待測物質(zhì)定量作用，借助指示劑或電位法確定滴定終點(diǎn)。

　　2.基本依據(jù)－－法拉第電解定律：電解時(shí)，電極上發(fā)身化學(xué)反應(yīng)的物質(zhì)質(zhì)量與通過電解池的電量Q成正比

　　即： m=MQ/zF = MI t /zF

　　3..化學(xué)反應(yīng)：陰極反應(yīng)： 2H+2e-=H2 陽極反應(yīng)： 2I-=I2+2e-

　　4.終點(diǎn)指示：多種方法

　　(1)化學(xué)指示劑－－I2

　　(2)電位法

　　(3)雙鉑極電流指示法

　　5.計(jì)算式：Wvc=MvcQ/zFm樣式中： F--- 法拉第常數(shù)（96487C）

　　Z---電極反應(yīng)中轉(zhuǎn)移的電子數(shù)注意：使電解效率100％

　　6.優(yōu)點(diǎn)：

　　1）無需標(biāo)準(zhǔn)化的試劑溶液，免去了大量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的準(zhǔn)備工作（配制，標(biāo)定）

　　2）只需要一個(gè)高質(zhì)量的供電器，計(jì)時(shí)器，小鉑絲電極，且易于實(shí)現(xiàn)自動化控制

　　3）若電流維持一個(gè)定值，可大大縮短了電解時(shí)間

　　4）電量容易控制及準(zhǔn)確測量；方法靈敏度，準(zhǔn)確度較高

　　5）滴定劑來自電解時(shí)的電極產(chǎn)物，可實(shí)現(xiàn)容量分析中不易實(shí)現(xiàn)的滴定過程，如Cu＋,Br2,Cl2產(chǎn)生后立即與待測物反應(yīng)。

　　7.缺點(diǎn)(難點(diǎn))：

　　要求電解過程沒有副反應(yīng)和漏電現(xiàn)象，即使電解電極上只進(jìn)行生成滴定劑的反應(yīng)，且電流的效率是100％

　　8.注：電流效率＝i樣÷i總＝ i樣÷（ i樣＋ i容＋i雜）

　　因?yàn)椋簩?shí)際電解過程中存在影響電流效率的因素，如，雜質(zhì)，溶劑，電極自身在電極上的反應(yīng)等

　　十二 紫外快速測定法

　　原理

　　維生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法，操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質(zhì)、樣品色素顏色和測定時(shí)間的影響。紫外快速測定法，是根據(jù)維生素C具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，于243nm處測定樣品液與堿處理樣品液兩者消光值之差，通過查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算樣品中維生素C的含量。

　　十三 光電比濁法的原理

　　原理

　　在酸性介質(zhì)中,抗壞鐵酸與亞硒酸(H2SeO3)能定量地進(jìn)行氧化還原反應(yīng).1mol的抗鐵酸能將2mol的亞硒酸還原成硒.在一定條件下,生成的元素硒在溶液中形成穩(wěn)定的懸濁液.當(dāng)抗鐵酸的濃度在0-4mg/25-50ml的范圍內(nèi),該溶液生成的濁度與抗壞鐵酸的含量成正比.將試液置分光光度計(jì)上測其濁度可以定量地測定抗壞鐵酸.

　　十四熒光分析法的原理

　　原理

　　用酸洗活性炭將抗壞鐵酸氧化為順式脫氫抗壞鐵酸,然后與鄰苯二胺縮合成一種熒光性化合物.樣品中其它熒光雜質(zhì)的干擾可以通過向氧化后的樣品中加入硼酸,使脫氫抗壞鐵酸形成 硼酸脫氫抗壞鐵酸的絡(luò)合物,它不與鄰二苯胺生成熒光化合物.這樣可以測定其它熒光雜質(zhì)的空白熒光強(qiáng)度而加以校正

　　十五 原子吸收間接測定法

　　原理

　　這是最近報(bào)導(dǎo)的一種Vc測定法，其原理是在酸性介質(zhì)中還原型Vc可將Cu2+定量地還原為Cu+并與SCN—反應(yīng)生成CuSCN沉淀，在高速離心機(jī)下有效地分離出沉淀，小心洗滌后再經(jīng)濃硝酸溶解，用原子吸收法測定銅含量，即可推知樣品中維生素C的含量。該法實(shí)驗(yàn)儀器較昂貴，主要問題是操作過程中反應(yīng)完全與否，沉淀物洗滌、離心反復(fù)多次，極容易帶來誤差。該法優(yōu)點(diǎn)是能不受果蔬自身顏色的干擾，有一定的發(fā)展前景。根據(jù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)此法結(jié)果偏低，還有待于進(jìn)一步優(yōu)化改善。

　　十六．金納米微粒分光光度法測定維生素C的方法

　　本發(fā)明公開了一種用金納米微粒分光光度法測定維生素Ｃ的方法。于５ｍＬ比色管中，依次加入０．１－２．０ｍＬ濃度為９５．６４μｇ／ｍＬ的ＨＡｕＣｌ↓［４］溶液，０．０２－０．５０ｍＬ濃度為１％的檸檬酸三鈉溶液，再加入０．００１－２．０ｍＬ濃度為０．３８ｍｇ／ｍＬ的維生素Ｃ溶液，混勻，加二次蒸餾水定容至刻度，再充分混勻，在分光光度計(jì)上，于５２０ｎｍ處測定吸收值，同時(shí)作空白試驗(yàn)。本發(fā)明測定方法簡單、快捷，所用儀器價(jià)廉，試劑易得

　　十七 L-半胱氨酸修飾電極測定維生素C的方法

　　研究了L-半胱氨酸修飾電極的制備方法和其電化學(xué)行為，并用于維生素C的測定，發(fā)現(xiàn)該電極對VC有明顯的電催化作用，在pH=10.0的NH4Cl-NH3·H2O緩沖溶液中，VC在L-半胱氨酸修飾電極上產(chǎn)生一靈敏的氧化峰，峰電流與VＣ的濃度在1.0×10-3~1.0×10-6mol/L的范圍內(nèi)呈良好的線形關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9962，其最低檢測限可達(dá)1.0×10-6mol/L，與紫外光譜法測定的結(jié)果一致。

　　測定維生素C有多種方法，包括采用I2或二氯靛酚（DPI）進(jìn)行氧化還原滴定。一般來說，滴定法是一種快速、簡便、準(zhǔn)確的技術(shù)，它通過滴定劑和被滴定物質(zhì)的等當(dāng)量反應(yīng)，精確測定被測物質(zhì)的含量。DPI對于維生素C具有良好的選擇性，是一種理想的氧化劑。

　　十八 梅特勒-托利多儀器法

　　傳統(tǒng)的滴定法是手工滴定，根據(jù)指示劑顏色的變化確定終點(diǎn)，通過測量滴定劑的消耗量，計(jì)算被測物質(zhì)的含量。手工滴定有很多不足：手工控制誤差較大，計(jì)算復(fù)雜，針對不同的反應(yīng)需要特殊指示劑。梅特勒-托利多的自動電位滴定儀解決了這一問題，通過測量滴定反應(yīng)中電位的變化確定終點(diǎn)，全自動操作、計(jì)算，測量快速，結(jié)果準(zhǔn)確。梅特勒-托利多的滴定儀配有記憶卡軟件包，存儲有成熟滴定方法，可方便快速解決實(shí)際應(yīng)用問題，并且稍作改動就能作為新的測定的實(shí)驗(yàn)方法。

　　除此之外，還有雙光束剩余染料差減比色法，2_6_二氯靛酚鈉動力學(xué)分光光度法、聚中性紅修飾電極方法、示波溴量法、流動注射化學(xué)發(fā)光抑制法、磷鉬鎢雜多酸作顯色劑快速檢測方法、溶氧測定裝置測定水果蔬菜中抗壞血酸含量的方法等。在此不做介紹。