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qpcr買試劑盒還要設(shè)計(jì)引物嗎?

QPCR與普通PCR相同,需要緩沖液、dNTP、Taq酶、引物、模板、水,QPCR試劑盒是將緩沖液、dNTP、Taq酶混合在一起,也需要引物和模板。引物可以添加到綠色人口的官方帳戶和免費(fèi)熒光定量PCR引物由專業(yè)人士提供。

為什么QPCR引物設(shè)計(jì)在跨外顯子的接頭區(qū)?

提取RNA時(shí),可能會(huì)與DNA混合。當(dāng)進(jìn)行PCR時(shí),引物可能與DNA結(jié)合。如果設(shè)計(jì)的引物跨越兩個(gè)外顯子,它們就不會(huì)與DNA結(jié)合。因?yàn)樵贒NA中,外顯子通常由內(nèi)含子分開。然而,在轉(zhuǎn)錄的mRNA中,內(nèi)含子被切斷,外顯子連接在一起。因此,用這種方法設(shè)計(jì)的引物可以避免與DNA結(jié)合,只與RNA結(jié)合。我們避免基因組擴(kuò)增。當(dāng)然,為了避免基因組擴(kuò)增,我們也可以用DNA酶來處理RNA,破壞可能存在的DNA。這樣,底漆的設(shè)計(jì)就不重要了。