做WB時(shí)羊抗鼠二抗的稀釋比例一般是多少？一般根據(jù)抗體的特異性和親和力。第一抗體的濃度范圍比較大，從1:200到1:1000，需要多次測(cè)定。第二抗體的稀釋比為1:5000～1:10000。流式抗體與普通

做WB時(shí)羊抗鼠二抗的稀釋比例一般是多少？

一般根據(jù)抗體的特異性和親和力。第一抗體的濃度范圍比較大，從1:200到1:1000，需要多次測(cè)定。第二抗體的稀釋比為1:5000～1:10000。

流式抗體與普通做WB抗體有哪些區(qū)別，如何選擇？

謝謝。除了抗原抗體反應(yīng)原理，似乎沒(méi)有其他類(lèi)似的地方。

流式細(xì)胞儀可以根據(jù)抗原或抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。這是一個(gè)高成本的定量實(shí)驗(yàn)。并不是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院都能做到這一點(diǎn)，結(jié)果是定性或半定量的，準(zhǔn)確性和敏感性一般。如果抗體不好或操作水平不好，就會(huì)出現(xiàn)很多雜帶，不易分析。

做wb時(shí)，一抗和二抗?jié)舛仁窃趺创_定的？怎么設(shè)置抗體滴度？

第一抗體的量與樣品中目標(biāo)分子的含量有關(guān)。如果含量高，就不必用太多抗體，以免浪費(fèi)，而且條帶太亮，無(wú)法分析。建議使用廠家的抗體濃度（宜橋神州將提供抗體劑量和自然細(xì)胞系檢測(cè)結(jié)果）。如果樣品與制造商的細(xì)胞不同，您可以嘗試上下探索一個(gè)或兩個(gè)濃度梯度；

可以使用第二抗體的劑量和您實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)劑量。如果效果不理想，可以根據(jù)陰性對(duì)照通過(guò)陽(yáng)性試驗(yàn)檢測(cè)第二抗體的效果，以及其他人使用的效果，看是否有問(wèn)題。

WB孵二抗，孵錯(cuò)了,還能重孵嗎? 本來(lái)是鼠抗孵成兔抗？

理論上，我還沒(méi)試過(guò)。不管怎樣，這是錯(cuò)誤的。你不妨嘗試一下，或者用條帶緩沖液洗一下，再加一個(gè)新的